O Brasil é um grande produtor agrícola e algumas de suas culturas são importantes tanto para exportação quanto para o consumo interno. Contudo, os ataques de fitopatógenos, em especial de fungos, reduzem sua produtividade. Além disso, quando se trata de exportação, alguns países restringem a entrada de produtos devido a aplicação intensiva de agrotóxicos. Nesse cenário, destaca-se a importância de conhecer e ampliar o uso de produtos naturais na agricultura, visto que apresentam benefícios ambientais, econômicos e sociais. Para isso, torna-se necessário buscar novas fontes de compostos com atividade antifúngica e também formas de estabilizá-las. Plantas do gênero Piper se destacam nesse contexto, em especial a Piper macedoi Yunck, que contém diversos compostos bioativos presentes em seu óleo essencial e extrato com atividade antifúngica contra Colletotrichum musae. Não há relatos na literatura sobre as aplicações dos metabólitos secundários de plantas dessa espécie, o que torna a presente pesquisa inédita. Portanto, o estudo teve como objetivo realizar a primeira análise da composição química do óleo essencial, extrato aquoso e hidroalcoólico de raízes e extrato aquoso de folhas de P. macedoi, bem como compreender a atividade antifúngica e mecanismos de ação do óleo essencial de raízes e do extrato aquoso de suas folhas contra C. musae, agente causal da antracnose da banana, doença de pós-colheita mais importante para essa cultura. Para isso foram realizadas revisões de literatura, análises químicas de metabólitos secundários e bioensaios antifúngicos. Tanto o óleo essencial emulsionado, quanto o extrato aquoso de folhas de P. macedoi apresentaram atividade antifúngica significativa, inibindo completamente o desenvolvimento de C. musae em condições in vitro. A excelente atividade em condições controladas revela os compostos dessa planta como fontes de compostos antifúngicos naturais com potencial para aplicação comercial.