O presente estudo teve como objetivo avaliar, in vitro, as propriedades de superfície, colonização microbiológica e atividade antifúngica e antimicrobiana de espécimes confeccionados a partir de fotopolímeros aplicados à manufatura aditiva e resina acrílica autopolimerizante. A amostra foi composta por um total de 300 corpos de prova, alocados em três grupos (n=100): grupo controle (GC), confeccionado em acrílico autopolimerizante; e grupos experimentais constituídos por fotopolímeros de impressão 3D nas resoluções de 50 μm (GE–50) e 100 μm (GE–100). As amostras foram avaliadas por meio de microscópio eletrônico de varredura (MEV) e rugosímetro óptico. A analise microbiológica foi realizada, em triplicata, a partir dos parâmetros de biomassa, matriz extracelular e atividade metabólica do biofilme formado pelos microrganismos Candida albicans (CA) e Streptococcus mutans (SM). A atividade antifúngica e antimicrobiana do fotopolímero em seu estado líquido, não polimerizado, foi avaliada durante o período de 48 horas pós incubação. A análise estatística foi realizada no programa SPSS por meio da análise de variância (ANOVA) seguida dos pós testes de Tukey e Dunnett (a=0,05). GE-50 e GE-100 exibiram superfícies mais irregulares, além da rugosidade média (Ra) e desvio médio quadrático (rms) estatisticamente maiores (GE-50-Ra: 2,96 ± 0,32 µm; rms: 4,05 ± 0,43 µm/GE-100-Ra: 3,76 ± 0,58 µm; rms: 4,79 ± 0,74 µm) em comparação com o GC (Ra: 0,52 ± 0,36 µm; rms: 0,84 ± 0,54 µm) (P < 0,05). A produção de biomassa e matriz extracelular por CA e SM e a atividade metabólica de SM foram significativamente diminuídas em GE-50 e GE-100 quando comparadas ao GC (P < 0,05). O crescimento de CA e SM foi inibido pelo fotopolímero aplicado à manufatura aditiva em seu estado líquido não diluído (48 h). Espécimes confeccionados a partir de fotopolímeros aplicados à manufatura aditiva impressos em resoluções de 50 e 100 μm apresentaram maior irregularidade, maior rugosidade da superfície, além de menor formação de biofilme para CA e SM em relação aos confeccionados em resina acrílica autopolimerizante.