O objetivo desse estudo foi realizar a identificação in silico e in vitro de inibidor com atividade dual frente aos alvos acetilcolinesterase (AChE) e butirilcolinesterase (BuChE). O capítulo 1 descreve através de uma revisão de literatura, de característica descritiva e natureza qualitativa através de artigos disponíveis nas plataformas PubMed e ScienceDirect (período 1961 a 2019) sobre métodos enzimático-espectrofotométricos para avaliação de atividade anticolinesterásica in vitro, baseadas no método colorimétrico de Ellman. Foram compilados dados de 146 trabalhos científicos e descritas variações na origem enzimática, nas concentrações de enzimas, substratos e reagentes, na escolha de tampão e pH a serem utilizados, no tempo de reação e leituras espectrofotométricas, na concentração e composição do diluente das amostras a serem testadas, além de discutir como tais variações podem trazer alterações nos resultados finais dos ensaios cinéticos. O capítulo 2 descreve as avaliações in vitro e in silico (acoplamento molecular e dinâmica molecular) da molécula ZINC390718 para a caracterização de seu potencial efeito frente a AChE e BuChE. As principais interações intermoleculares identificadas foram ligações de hidrogênio e interação de empilhamento π com grupamentos nitrogenados da molécula e os sítios ativos de ambos os alvos enzimáticos. A análise in vitro da molécula ZINC390718 revelou atividade inibitória dual frente a AChE (CI50 = 543,8 µM) e BuChE (CI50 = 241,1 µM) e sua atividade citotóxica frente a cultivos de astrócitos foi considerada baixa.