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Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
BIOTECNOLOGIA (28002016006P3)
Educação Presencial
Bioprospecção de agentes anticâncer e inseticidas a partir da espécie Annona leptopetala (R.E.Fr.) H.Rainer (Annonaceae)
CRISTIANE MARIA SOUZA DE CASTRO RODRIGUES
TESE
22/12/2021

Annona leptopetala é uma planta medicinal encontrada na Caatinga, conhecida popularmente como "ata-brava" ou "bananinha", e é tradicionalmente usada para tratar inflamações, má digestão e câncer. O objetivo deste trabalho foi realizar a bioprospecção de metabólitos secundários da espécie, mediante a avaliação das atividades biológicas antitumorais e inseticidas, associada à caracterização química de extratos e óleos essenciais ativos, empregando estratégias de desreplicação, RMN, CG/EM e LC-MS. Para isto, óleos essenciais dos ramos (OER), das folhas frescas (OEFF) e secas (OEFS) foram obtidos por hidrodestilação usando aparelho do tipo Clevenger. Os extratos das folhas, ramos e sementes foram obtidos pelo processo de maceração empregando-se hexano e metanol. Os extratos metanólicos das folhas e dos ramos, após a etapa de tratamento ácido-base, forneceram as respectivas frações alcaloídicas. O extrato hexânico das sementes (EHSAL) foi submetido à cromatografia líquida a vácuo (CLV), resultando na fração enriquecida com acetogeninas, EAc. A análise por CG/EM permitiu identificar 42 compostos no OEFF, 40 compostos no OEFS e 61 compostos no OER. O OEFF e OEFS foram majoritariamente constituídos por monoterpenos oxigenados, como 1,8-cineol (25,4 e 13,3%) e linalol (10,07 e 8,97%), enquanto o OER apresentou maior teor de sesquiterpenos hidrogenados, representados pelo biciclogermacreno (14,95%) e espatulenol (13,92%). A caracterização química da fração alcaloídica dos ramos (FAR) por HPLC-DAD-ESI-MSn resultou na desreplicação de 27 alcaloides, pertencentes às classes dos aporfínicos, benziltetrahidroisoquinolínicos e tetrahidroprotoberberínicos, dos quais, a reticulina, coclaurina, N-metilcoclaurina, 13-O-metilcoclaurina, N-formilreticulina, N-oxireticulina, N-metillaurotetanina, N-oxiisocoridina, actinodafinina, N-metilisopilina, nandigerina, norushinsunina, estefanina, isoboldina, coridalmina e xilopina estão sendo relatadas pela primeira vez na espécie. Ademais, uma possível nova acetogenina bis-tetrahidrofurânica adjacente, leptolecina, foi isolada da fração citotóxica EAc, conforme elucidação proposta por RMN 1D e 2D e MS. Quanto aos ensaios biológicos, a avaliação frente ao bioindicador Artemia salina apontou os extratos das sementes e a FAR como amostras promissoras através de valores de CL50 entre 0,001-7,26 μg/mL. Uma correlação positiva foi observada entre os diferentes ensaios inseticidas e o ensaio sobre A. salina, sendo as amostras derivadas das sementes as mais ativas, com valores de CL50 de 2,65 a 70,52 μg/mL frente ao Aedes aegypti, e no ensaio contra Liriomiza sativae e Bemisia tabaci exibiram percentual de mortalidade pupal, larval e ninfal entre 61 e 92%. No ensaio antiproliferativo in vitro, as amostras ativas apresentaram percentual de inibição de crescimento entre 53 e 97% e valores de IC50 entre 4,36 e 23,10 μg/mL frente às linhagens de células tumorais HepG2, HCT116 e B16-F10. Estes resultados revelam o potencial desta espécie como fonte de agentes que podem compor medicamento antitumoral ou fitossanitário à base de extratos vegetais e/ou frações enriquecidas, além de contribuir para o conhecimento quimiotaxonômico da espécie e da família Annonaceae.

Annona;Desreplicação;Acetogeninas;Alcaloides;Antiproliferativo;Inseticida.
Annona leptopetala is a medicinal plant found in the "Caatinga" known as "ata-brava" or "bananinha" and is traditionally used to treat inflammation, indigestion and cancer. The aim of this work was to perform the bioprospecting of secondary metabolites of the species, through the evaluation of the antitumor and insecticidal biological activities associated with the chemical characterization of extracts and essential oils active, employing dereplication, NMR, GC/MS and LC-MS strategies. For this, essential oils from the branches (OER), fresh leaves (OEFF) and dried leaves (OEFS) were obtained by hydrodistillation using a Clevenger apparatus. The extracts of leaves, branches and seeds were obtained by maceration using hexane and methanol. The methanolic extracts of the leaves and branches, after the acid-base treatment step, yielded the respective alkaloidal fractions, while the hexanic extract of the seeds (EHSAL) was subjected to liquid chromatography under vacuum (CLV), resulting in the acetogenin-enriched fraction, EAc. Through GC/MS analysis it was possible to identify 42 compounds in the OEFF, 40 compounds in the OEFS and 61 compounds in the OER. The OEFF and OEFS were mainly composed of oxygenated monoterpenes, such as 1,8-cineol (25.4 and 13.3%) and linalool (10.07 and 8.97%), while the OER presented higher content of hydrogenated sesquiterpenes, represented by bicyclogermacrene (14.95%) and spathulenol (13.92%). The chemical characterization of the alkaloidal fraction of the branches (FAR) by HPLC-DAD-ESI-MSn resulted in the dereplication of 27 alkaloids, belonging to the classes of aporphine, benzyltetrahydroisoquinoline and tetrahydroprotoberberine, of which, reticuline, coclaurine, N-methylcoclaurine, 13-O-methylcoclaurine, N-formylreticuline, reticuline N-oxide, N-methylaurotetanine, isocorydine N-oxide, actinodaphnine, N-methylisopiline, nandigerine, norushinsunine, stephanine, isoboldine, corydalmine and xylopine are being reported for the first time in the species. Furthermore, a possible new adjacent bis-tetrahydrofuran acetogenin, leptolecin, was isolated from the cytotoxic EAc fraction, as proposed elucidation by 1D and 2D NMR and MS. Concerning the biological assays, the evaluation against the bioindicator of Artemia salina pointed out the seed extracts and the FAR as promising samples through CL50 values between 0.001-7.26 μg/mL. A positive correlation was observed between the different insecticide assays and the assay on A. salina, being the samples derived from the seeds the most active, with LC50 values of 2.65 and 70.52 μg/mL against Aedes aegypti, and in the assay against Liriomiza sativae and Bemisia tabaci showed percentage of pupal, larval and nymphal mortality between 61 and 92%. In the in vitro antiproliferative assay, the active samples showed a percentage of growth inhibition between 53 and 97% and CI50 values between 4.36 and 23.10 μg/mL against the tumor cell lines HepG2, HCT116 and B16-F10. These results reveal the potencial of this species as a source of agents that can compose antitumor or phytosanitary drug based on plant extracts and/or enriched fractions, in addition to contributing to the chemotaxonomic knowledge of the species and the Annonaceae family.
Annona;Dereplication;Acetogenins;Alkaloids;Antiproliferative;Insecticide.
01
1183
PORTUGUES
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
O trabalho não possui divulgação autorizada

Contexto

BIOTECNOLOGIA COM ÊNFASE EM RECURSOS NATURAIS DA REGIÃO NE
ATIVIDADES BIOLÓGICAS DE PRODUTOS NATURAIS, RECOMBINANTES E SINTÉTICOS
-

Banca Examinadora

JACKSON ROBERTO GUEDES DA SILVA ALMEIDA
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
MARCELO CAVALCANTE DUARTE Participante Externo
LUCAS SILVA ABREU Participante Externo
JACKSON ROBERTO GUEDES DA SILVA ALMEIDA Docente - PERMANENTE
HARLEY DA SILVA ALVES Participante Externo
EMMANOEL VILACA COSTA Participante Externo

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - Programa de Demanda Social 48

Vínculo

Servidor Público
Instituição de Ensino e Pesquisa
Ensino e Pesquisa
Não
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