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Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALFENAS
CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS (32011016003P1)
Educação Presencial
"Estudo da ação da Angiotensina 1-7 na epilepsia: foco na neuromodulação do metabolismo de glutamato em astrócitos"
JESSICA RODRIGUES PEDRO
DISSERTAÇÃO
31/03/2022

A epilepsia é uma das doenças neurológicas crônicas mais prevalentes no mundo, sendo umadesordem do cérebro identificada pela capacidade de gerar crises espontâneas e pelasconsequências neurobiológicas, cognitivas, psicológicas e sociais que esta condição acarreta. A epileptogênese está diretamente relacionada ao desbalanço entre os neurotransmissores excitatórios e inibitórios, principalmente o glutamato e o GABA, respectivamente. Nesse cenário, os astrócitos tem papel fundamental, diminuindo a toxicidade do glutamato em excesso na fenda sináptica, através da recaptação feita pelos transportadores astrocíticos de glutamato, sendo os principais, GLAST E GLT-1. Várias evidências, sugerem que o SRA cerebral desregulado pode estar implicado na neurodegeneração, onde podemos citar a Ang II, que após ativar o receptor AT1 causa efeitos como, vasoconstrição, neuroinflamação, estresse oxidativo, e outros. A Ang II e Ang-(1-7) geralmente tem efeitos opostos, pelo menos em algumas condições fisiopatológicas específicas, o que sugere que esse peptídeo pode ser útil no desenvolvimento de agentes terapêuticos para neutralizar o papel negativo da Ang II em muitas doenças, como a epilepsia. Nesse cenário, analisamos a ação da Ang-(1-7) e seu possível papel neuroprotetor, principalmente na neuromodulação do metabolismo de glutamato em astrócitos, para isso estudamos transportadores e enzimas envolvidas no metabolismo do glutamato, utilizando o modelo de epilepsia in vitro. Para a realização dos experimentos, realizamos uma cultura primária de astrócitos isolados de hipocampo e córtex frescos, coletados de ratos neonatos (CEUA 0004/2021) e para realizar o modelo de epilepsia in vitro, utilizamos excesso de glutamato extracelular (1mM). As células foram incubadas com Ang-(1-7) (1nM) e o antagonista do receptor Mas, A779 (10 μM). Em seguida, foram fixadas e submetidas à imunofluorescência para GFAP (proteína ácida fibrilar glial), GLAST e GLT-1 (transportadores de glutamato). Os valores obtidos com a quantificação do sinal fluorescente foram plotados e analisados utilizando-se o programa Graph-Pad Prism (GraphPad, San Diego, CA). Os dados obtidos no presente estudo, mostraram que a Ang-(1-7) é capaz de alterar os componentes da via glutamato-glutamina dos astrócitos e que esta ação é diferente entre hipocampo e córtex cerebral, assim como os efeitos são dependentes das condições fisiológicas/patológicas. Além disso, A Ang-(1-7) parece ter um efeito neuroprotetor nas duas regiões, aumentando ou diminuindo a expressão dos transportadores, conforme a demanda metabólica, com o propósito de manter a homeostase.

epilepsia;astrócitos;Ang-(1-7), GFAP;angiotensina.
Epilepsy is one of the most prevalent chronic neurological diseases in the world, being a brain disorder identified by the ability to generate spontaneous seizures and the neurobiological, cognitive, psychological and social consequences that this condition entails. Epileptogenesis is directly related to the imbalance between excitatory and inhibitory neurotransmitters, mainly glutamate and GABA, respectively. In this scenario, astrocytes play a fundamental role, reducing the toxicity of excess glutamate in the synaptic cleft, through the reuptake made by astrocytic glutamate transporters, the main ones being GLAST AND GLT-1. Several evidences suggest that deregulated brain RAS may be involved in neurodegeneration, where we can mention Ang II, which after activating the AT1 receptor causes effects such as vasoconstriction, neuroinflammation, oxidative stress, and others. Ang II and Ang-(1-7) generally have opposite effects, at least in some specific pathophysiological conditions, which suggests that this peptide may be useful in the development of therapeutic agents to counteract the negative role of Ang II in many diseases, like epilepsy. In this study, we analyzed the action of Ang-(1-7) and its possible neuroprotective role, mainly in the neuromodulation of glutamate metabolism in astrocytes, for that we studied transporters and enzymes involved in glutamate metabolism, using the in vitro epilepsy model. To carry out the experiments, we performed a primary culture of astrocytes isolated from fresh hippocampus and cortex, collected from neonatal rats (CEUA 0004/2021) and to perform the in vitro epilepsy model, we used excess extracellular glutamate (1mM). Cells were incubated with Ang-(1-7) (1nM) and the Mas receptor antagonist A779 (10 μM). Then, they were fixed and submitted to immunofluorescence for GFAP (glial fibrillary acidic protein), GLAST and GLT-1 (glutamate transporters). The values obtained with the quantification of the fluorescent signal were plotted and analyzed using the Graph-Pad Prism program (GraphPad, San Diego, CA). The data obtained in the present study showed that Ang-(1-7) is capable of altering the components of the glutamate- glutamine pathway of astrocytes and that this action is different between the hippocampus and the cerebral cortex, as well as the effects are dependent on the conditions physiological/pathological. Furthermore, Ang-(1-7) seems to have a neuroprotective effect in both regions, increasing or decreasing the expression of transporters, according to the metabolic demand, in order to maintain homeostasis.
epilepsy;astrocytes;Ang-(1-7);GFAP;angiotensin.
01
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PORTUGUES
UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALFENAS
O trabalho possui divulgação autorizada
dissertação versão final_Jéssica.pdf

Contexto

CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
BIOQUÍMICA E FARMACOLOGIA APLICADAS ÀS CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
ESTUDO DOS MECANISMOS BIOQUÍMICOS/MOLECULARES E CARACTERIZAÇÃO DE POSSÍVEIS ALVOS FARMACÊUTICOS ENVOLVIDOS NA PATOGÊNESE E TRATAMENTO DAS EPILEPSIAS E SUAS COMORBIDADES

Banca Examinadora

MARILIA GABRIELLA ALVES GOULART PEREIRA
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
MARIA RITA RODRIGUES Docente - PERMANENTE
MARILIA GABRIELLA ALVES GOULART PEREIRA Docente - PERMANENTE
LAURA LETICIA DE FREITAS CHAMA Participante Externo

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLOGICO - Bolsa de Mestrado no País GM 24

Vínculo

Bolsa de Fixação
Instituição de Ensino e Pesquisa
Ensino e Pesquisa
Sim
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