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Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
BIOTECNOLOGIA (28002016006P3)
Educação Presencial
Atividade apoptótica sobre osteoclastos, antimicrobiana e antitumoral de plantas medicinais cultivadas no Recôncavo Baiano
PAULO JOSE LIMA JUIZ
TESE
19/06/2013

A doença periodontal é uma patologia de etiologia multifatorial, onde a resposta imune ao desafio microbiano resulta em ativação de osteoclastos e reabsorção do osso alveolar, culminando com a perda do elemento dental. Com o objetivo de estudar a atividade antimicrobiana e controle da ativação de osteoclastos, compostos extraídos de plantas medicinais (Ocimum americanum L., Ocimum basilicum L., Mentha x villosa Huds, Chenopodium ambrosioides L., Lippia alba (Mill) N.E.Br.) cultivadas no Recôncavo da Bahia foram estudados neste trabalho. A atividade antimicrobiana frente aos micro-organimsos Escherichia coli sensível à trimetoprima e resistente à sulfonamidaCCMB 261, Staphylococcus aureus resistente à estreptomicina e dihidrostreptomicina CCMB 262, Staphylococcus aureus resistente à novobiocina CCMB 263, Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 43717), Fusobacterium nucleatum (ATCC 25586), Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), Bacteroides fragilis (ATCC 25285) foi avaliada por meio da determinação da concentração inibitória mínima e concentração bactericida mínima segundo metodologia proposta pelo CLSI, com modificações. As concentrações de trabalho utilizadas para os ensaios com osteoclastos foram determinadas por meio de estudos prévios de atividade antiproliferativa frente as linhagens tumorais K562 (leucemia), MCF-7 e MDA-231 (câncer de mama). A avaliação da apoptose em osteoclastos foi feita pelo teste TUNEL e por imunocitoquímica para receptor Fas. Os resultados mostraram que os óleos essenciais das plantas estudadas foram mais efetivos em inibir o crescimento dos micro-organismos que os extratos metanólicos, sendo a bactéria E. coli a mais resistente a ação dos compostos. Entre os periodontopatógenos, a bactéria P.gingivalis foi a mais sensível a ação dos compostos e A. actinomycetemcomitans a mais resistente. Os óleos essenciais do gênero Ocimum não foram tóxicos para células humanas e foram capazes de inibir o crescimento de P.gingivalis e F.nucleatum, porém não apresentaram atividade antiosteoclástica. Os extratos metanólicos extraídos das plantas do gênero Ocimum, na concentração de 300 µg.mL-1, foram capazes de induzir apoptose em 100% dos osteoclastos tratados. Os compostos atóxicos limoneno e citral na concentração de 5 µg.mL-1 induziram apoptose em respectivamente, 80% e 100% de osteoclastos. Na concentração de 50 µg.mL-1, os compostos citral, limoneno, carvona, linalol foram capazes de induzir apoptose em osteoclastos. Este trabalho também mostrou que os compostos extraídos das plantas medicinais estudadas apresentaram atividade antiproliferativa, sendo o composto citral mais ativo frente a linhagem K562 (IC50 8,61 ± 1,29 µg.mL-1) e MDA-231 (IC50 41,98 ± 7,45 µg.mL-1) e o composto linalol mais efetivo frente a linhagem MCF-7 (IC50 18,86 ± 1,32 µg.mL-1). Os compostos testados não foram capazes de induzir diferenciação eritróide em células K562, sendo os extratos metanólicos das plantas do gênero Ocimum aqueles que mostraram as melhores atividades antiproliferativas contra a linhagem K562. Com exceção das plantas M. villosa e C. ambrosioides, que foram consideradas tóxicas, as plantas medicinais estudadas mostraram potencial biotecnológico para uso em odontologia, no entanto ensaios in vivo são necessários para comprovar a atividade dos compostos estudados.

extratos, óleo essencial, osteoclasto, periodontopatógenos, plantas medicinais
Periodontal disease is a multifactorial disease, where the immune response to microbial challenge results in activation of osteoclasts and alveolar bone resorption, resulting in the loss of the dental element. Aiming to study the antimicrobial activity and control of activation of osteoclasts, compounds extracted from medicinal plants grown in the Reconcavo of Bahia (Ocimum americanum L., Ocimum basilicum L., Mentha x villosa, Chenopodium ambrosioides L., Lippia alba (Mill) N.E.Br.) were studied in this work. To test the antimicrobial activity against Escherichia coli sensitive to trimethoprim and resistant to sulfonamid CCMB 261, Staphylococcus aureus resistant to streptomycin and dihydrostreptomycin CCMB 262, Staphylococcus aureus resistant to novobiocin CCMB 263, Aggregatibacter actinomycetemcomitans (ATCC 43717), Fusobacterium nucleatum (ATCC 25586), Porphyromonas gingivalis (ATCC 33277), Bacteroides fragilis (ATCC 25285), minimum inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration were determined according to the methodology proposed by CLSI, with modifications. Working concentrations for apoptosis assays were determined through previous studies of antiproliferative activity on K562 (leukemia), MCF-7 and MDA-231 (breast cancer) tumor cell lines. TUNEL methodology and immunocytochemistry to Fas receptor were used to evaluate apoptosis in osteoclasts. The results showed that the essential oils of plants studied were more effective in inhibiting the growth of microorganisms than the methanolic extracts. Higher minimum inhibitory concentrations (MIC) were shown to E. coli. Among the periodontal pathogens, P. gingivalis was the most sensitive to the action of the compounds and A. actinomycetemcomitans was the most resistant. The essential oils of the genus Ocimum were not toxic to normal human cells and were able to inhibit the growth of P. gingivalis and F.nucleatum, but did not show any activity in osteoclasts. The methanolic extracts derived from plants of the genus Ocimum were able to induce apoptosis in 100% of treated osteoclasts in a concentration of 300 μg.mL-1. The compounds limonene and citral at a concentration of 5 μg.mL-1 were able to induce apoptosis in, respectively, 80% and 100% of osteoclasts. At the concentration of 50 μg.mL-1, compounds citral, limonene, carvone, linalool were able to induce apoptosis in osteoclasts. This work also showed that compounds extracted from medicinal plants studied showed antiproliferative activity; citral was active against K562 cells (IC50 8.61 ± 1.29 μg.mL-1) and MDA-231 (IC50 41.98 ± 7.45 μg.mL-1) and linalool was most effective against MCF-7 lineage (IC50 18.86 ± 1.32 μg.mL-1). Compounds tested were not able to induce erythroid differentiation in K562 cells, and methanol extracts of genus Ocimum plants showed the best antiproliferative activity against K562 cells. Medicinal plants studied showed biotechnological potential for use in dentistry, although studied concentrations of M. villosa and C. ambrosioides were considered toxic, so that lower concentrations could show promising biological activities. Besides, in vivo assays are needed to confirm the activities of the compounds studied.
essential oil, extract, medicinal plants, osteoclasts, periodontopathogens
1
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PORTUGUES
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
O trabalho possui divulgação autorizada
paulo_jose_lima_juiz-tese.pdf

Contexto

BIOTECNOLOGIA COM ÊNFASE EM RECURSOS NATURAIS DA REGIÃO NE
ATIVIDADES BIOLÓGICAS DE PRODUTOS NATURAIS, RECOMBINANTES E SINTÉTICOS
Atividades biológicas de produtos naturais da biota da região Nordeste

Banca Examinadora

ANA PAULA TROVATTI UETANABARO
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
LUCAS MIRANDA MARQUES Participante Externo
GEORGE MARIANE SOARES SANTANA Participante Externo
SORAYA CASTRO TRINDADE Participante Externo
SILVIA LIMA COSTA Docente - COLABORADOR

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - PDSE - Programa de Doutorado Sanduíche no Exterior 6

Vínculo

Servidor Público
Instituição de Ensino e Pesquisa
Ensino e Pesquisa
Sim
Plataforma Sucupira
Capes UFRN RNP
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