Espécies silvestres de Manihot são fontes de genes úteis para o melhoramento genético da mandioca cultivada, evidenciando a necessidade e a importância de conservação desse germoplasma. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da sacarose, manitol e sorbitol na conservação in vitro de mandioca, e avaliar a tolerância ao crioarmazenamento de meristemas e grãos de pólen de espécies de Manihot. Nos trabalhos envolvendo a conservação in vitro, foram utilizadas microestacas de mandioca oriundas do BAG da Embrapa Mandioca e Fruticultura em três experimentos distintos. O primeiro constou na avaliação de cinco concentrações de sacarose (0, 14,61; 29,22; 43,84; 58,45 mM) nos BGMs 264, 265, 1037 e 1282; enquanto que no segundo e terceiro foi utilizado o acesso BGM 1282 em concentrações combinadas de sacarose (0 e 58 mM) com 0; 2,75; 6,86; 13,73 e 27,45 mM de manitol ou sorbitol. Nos testes de criopreservação de meristemas foi utilizado o método droplet-vitrificationnas espécies M. tristise M. cartaginenses. Nas avaliações de viabilidade polínica foram utilizados os métodos in vivo, in vitro, colorimétrio e fluorométrico e, para criopreservação, foram utilizado grãos de pólen fresco e desidratado em câmara de fluxo laminar. O melhor resultado observado para a conservação in vitro foi na concentração de 58,45 mM de sacarose no experimento 1, e de 27,45 mM manitol ou sorbitol na ausência de sacarose no experimento 2 e 3. O método dropletvitrificationfoi eficiente na criopreservação dos meristemas, com taxas de regeneração acima de 60%. O método fluorométrico foi o mais eficaz na estimativa da viabilidade polínica. Grãos de pólen foram intolerantes ao crioarmazenamento.