Introdução: A Cultura de Segurança (CS) caracteriza-se por ser resultado de valores, atitudes, crenças e comportamentos individuais, ou em grupo, que representam interesses coletivos no oferecimento de uma assistência segura. A CS tem recebido crescente atenção nas organizações pelo aumento da complexidade dos cuidados, o que aumenta a potencialidade da ocorrência de incidentes, erros ou falhas, especialmente em hospitais. A avaliação do status da Cultura de Segurança do Paciente (CSP) em hospitais permite identificar e administrar, prospectivamente, questões relevantes nas rotinas de trabalho. Objetivo: Avaliar as características da Cultura de Segurança do Paciente (CSP) dos profissionais de um hospital público de ensino no interior do estado de São Paulo. Métodos: Estudo quantitativo, observacional, do tipo transversal, realizado nos meses de agosto a dezembro de 2021, em hospital terciário público que desenvolve atividades de ensino. Foram coletadas respostas de 174 profissionais com o questionário Hospital Survey on Patient Safety Culture 1.0 (HSOPSC). Os dados foram analisados descritivamente, com dados de frequência, pelos softwares Hospital Data Entry and Analysis Tool e SPSS 2.0, e a avaliação da confiabilidade foi feita pelo alfa de Cronbach. Os preceitos éticos estabelecidos para pesquisas com seres humanos foram cumpridos. Resultados: Não foi observada nenhuma dimensão (D1-12) que pudesse ser nomeada “fortalecida” para a CSP. Duas dimensões (D1, D2) foram caracterizadas “neutras”, e dez dimensões (D3-12), “enfraquecidas”. As dimensões “trabalho em equipe no âmbito das unidades” (54%, α=0,68), “aprendizado organizacional” (65%, α=0,79) e “expectativas e ações dos supervisores e gerentes para promoção da segurança do paciente” (49%, α=0,58) apresentaram maior positividade, enquanto as dimensões “trabalho em equipe entre as unidades/áreas” (28%, α=0,65), “passagem de plantão/turno e transferências” (27%, α=0,74) e “respostas não punitivas ao erro” (19%, α=0,39) tiveram a menor positividade. A avaliação geral da segurança do paciente na unidade de trabalho foi positiva para 36% dos profissionais. Foi verificado que 75% dos participantes não notificaram evento adverso nos últimos 12 meses. Conclusões: Os resultados encontrados nas 12 dimensões demonstraram a necessidade de um eficiente esforço institucional para aperfeiçoar a segurança do paciente que, de maneira geral, mostrou-se deficiente.