O Rhipicephalus (Boophilus) microplus é a principal espécie que acometem bovinos comprometendo a produção e produtividade leiteira no Brasil, estima-se que sejam gastos 3 bilhões de dólares anuais ocasionados pela sua presença e 18 bilhões/ano com gastos relacionados ao tratamento de doenças transmitidas pelo parasitismo. Desta forma, o presente estudo objetivou-se avaliar o efeito in vitro do óleo essencial Corymbia citriodora sobre as fêmeas ingurgitadas do carrapato bovino e identificar e quantificar os compostos presentes no óleo por cromatografia gasosa. O experimento foi conduzido no setor de bovinocultura do Ifes- campus de Alegre e no Laboratório de Química do Instituto Federal do Espírito Santo. Foram coletadas fêmeas ingurgitadas do carrapato em vacas mestiças da raça Girolando, após a ordenha matinal, durante o período de lactação, para tratamento in vitro com óleo essencial de eucalipto. Nos testes in vitro foram utilizados: dois grupos controles negativos, água destilada e água destilada e Tweem 80 e quatro concentrações de óleo de eucalipto 5 μl /mL, 10 μl /mL, 20 μl /mL e 40 μl /mL. As avaliações foram feitas em 24, 48 e 72 horas após a pulverização do óleo essencial. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado com três repetições. Após as avaliações, estimou-se a CL50, para definir a melhor dosagem a ser recomendada do óleo essencial. Foram observados no óleo essencial de eucalipto Corymbia citriodora constituintes como: isopulegol, citronelal, α-Terpineol, citronelol, acetato do isoborneal, acetato do citronelol, cariofileno e diethyl phthalate. A concentração letal estimada para ocasionar mortalidade de 50% dos indivíduos foi de 1, 55 mL/L. Os resultados apontam que o concentrado emulsionado de óleo essencial de eucalipto Corymbia citriodora pode ser usado como alternativa no controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus, visando à diminuição no controle químico convencional e consequentemente menor impacto ambiental.