As cumarinas representam importante fonte de substâncias farmacologicamente ativas produzidas através do metabolismo secundário das plantas. 3-(3’,4’ – Dihidroxifenil) - 8- Hidroxicumarina é um novo derivado cumarínico com potentes propriedades antioxidantes, importante na eliminação de radicais livres e espécies reativas do oxigênio. Pertencentes a classe química benzopirona, o andaime cumarínico pode ser utilizado de maneira estratégica, atuando como agentes antitumorais, antioxidantes, antiparasitários, antibacterianos, inibição de diversas enzimas importantes em potenciais antivirais e doenças neurodegenerativas. Considerando a ampla variedade de cumarinas sintéticas, e seu potencial terapêutico, é de fundamental importância a avaliação da segurança de seu uso por seres humanos. Nesse contexto, o objetivo do presente estudo foi de avaliar o potencial citotóxico e genotóxico da cumarina sintética 3-(3’,4’ – Dihidroxifenil) - 8- Hidroxicumarina sobre células mononucleares de sangue periférico e células de hepatocarcinoma humano – HepG2/C3A. A avaliação da citotoxicidade foi realizada por intermédio dos ensaios com o MTT e coloração com o azul de tripan. A genotoxicidade foi investigada através do ensaio cometa e do teste do micronúcleo com bloqueio de citocinese. Os resultados obtidos nos ensaios de citotoxicidade, utilizando concentrações entre 0,1 e 20 µg/mL da cumarina teste, evidenciaram que não houve diminuição na viabilidade celular em ambas as células, pelo ensaio com o azul de tripan. No entanto, pelo teste do MTT observou-se uma diminuição significativa na viabilidade das células HepG2/C3A em todas concentrações testadas, nos tempos de 48 e 72 horas de exposição. Nos ensaios de avaliação genotóxica, os dados obtidos não evidenciaram danos significativos ao DNA e/ou mutações cromossômicas em ambos os tipos de células. Frente aos resultados observados, pode-se concluir que a 3-(3’,4’ – Dihidroxifenil) - 8- Hidroxicumarina, até a concentração de 20 µg/mL, não apresentou efeitos genotóxicos em células humanas com e sem metabolização por enzimas hepáticas. Por outro lado, constatou-se aumento de morte celular das células HepG2/C3A quando expostas à substância teste por um período de tempo maior.