Esta pesquisa, intitulada Educação Física, Gênero e Sexualidade na Educação Infantil: discursos, práticas e possibilidades, tem como objetivo analisar e problematizar o debate das relações de gênero e sexualidade na formação docente e nas práticas pedagógicas, a partir do discurso de professoras e professores de Educação Física da Educação Infantil da Rede Municipal de Vitória/ES. Para isso, aproxima-se dos estudos pós-estruturalistas, utilizando a noção de discurso e relações de poder em Foucault (1988). A pesquisa organiza-se metodologicamente em uma perspectiva qualitativa de interpretação pós-crítica que “permite propor maneiras alternativas de ver e pensar os fenômenos” (Gastaldo, 2012, p. 12). Nesse sentido, articula pesquisa bibliográfica, pesquisa documental e pesquisa descritivo-interpretativa. A pesquisa bibliográfica indica uma escassez na produção acadêmico-científica da pós-graduação em Educação Física em relação às questões de gênero e sexualidade na Educação Infantil nos últimos dez anos, evidenciando a necessidade de estudos que abordem a temática nesta etapa de ensino. Na análise de documentos nacionais e municipais de Vitória/ES que orientam a Educação Infantil, verificam-se contradições, avanços, disputas e múltiplas resistências em relação ao gênero e à sexualidade na infância; no entanto, esses documentos não aprofundam as questões de gênero e sexualidade para essa etapa de ensino. A pesquisa revela que as/os profissionais de Educação Física da Educação Infantil enfrentam diversos desafios ao lidar com essa temática, como a complexidade dos conceitos, o medo de reações negativas por parte de familiares e/ou equipe escolar e a falta de orientações para uma abordagem pedagógica intencional. Apesar das dificuldades, as/os educadores demonstram interesse em discutir questões de gênero em suas práticas, porém a sexualidade é identificada como um tema complexo e delicado. Os resultados desta pesquisa evidenciam a urgência de desenvolver estudos e propostas de formação que promovam uma discussão mais aprofundada e crítica sobre gênero e sexualidade na Educação Infantil. Neste trabalho afirmamos que é urgente ampliar as discussões de gênero e sexualidade junto às/aos professores de Educação Física no tocante à Educação Infantil. Acreditamos que estas questões podem colaborar para a construção de práticas, propostas educativas e processos formativos que contemplem uma percepção mais diversa e plural, afeita ao direito à diferença.