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Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS (BIOFÍSICA) (31001017012P6)
Educação Presencial
Fatores inflamatórios e desmielinização promovem plasticidade retinofugal via modulação colinérgica e glutamatérgica.
SHEILA ESPIRITO SANTO ARAUJO
TESE
12/05/2014

O desenvolvimento do sistema visual depende da formação de conexões precisas mediada pela atividade elétrica glutamatérgica e colinérgica. Atividade elétrica alterada implica mudanças sinápticas, podendo resultar em plasticidade estrutural. Esses eventos podem ser regulados reciprocamente por proteínas imunes e mielinização, de modo que alterações dos seus conteúdos promovem prejuízo no refinamento das conexões. Modelos de neuroinflamação, como injeção intraocular de zimosan ou da citocina pró-inflamatória IL-2, ou ainda a desmielinização inflamatória induzida pela dieta com cuprizona podem ser utilizados para estudar as consequências da neuroinflamação e/ou desmielinização em distintos fenômenos do SNC. Assim, investigamos o efeito desses modelos na plasticidade retinofugal, e os mecanismos neuroquímicos envolvidos. Ratos Lister Hooded receberam injeção intravítrea de IL-2 (156U/ μL) ou zymosan (60,5ug/uL) no DPN 10 ou 21 e foram eutanaziados no DPN14 ou 28. Camundongos C57BL/6 no DPN 42 foram alimentados por 3 ou 5 semanas com 0.2% de cuprizona misturada à ração. Injeção de IL-2 induziu, na retina em 24h, aumento da expressão de Iba-1, redução do conteúdo da subunidade β2 do nAChR, concomitantemente à redução do produto gênico sensível a atividade, Egr-1, e da PSD-95, indicando enfraquecimento da atividade através da supressão colinérgica, com retração de contatos sinápticos. Além disso, a injeção de IL-2 reduziu após 96h de sobrevida o conteúdo das subunidades de AMPAR e NMDAR, GLUR2 e NR2B, paralelamente à redução da atividade da Acetilcolinesterase. No entanto, o conteúdo de Egr-1 e PSD-95 estavam inalterados, sugerindo que prejuízos sobre a atividade glutamatérgica foram contrabalançados pelo aumento colinérgico. Paralelamente, injeção intraocular do traçador HRP mostrou que IL-2 induz arborização retinotectal para regiões ectópicas, como resultado das alterações retinianas. Similarmente, inflamação intravítrea com redução de TNF-α induzida por zimosan, promoveu espalhamento retinotectal dentro e ao final do período critico. O modelo de dieta com cuprizona não alterou os níveis de RNAm para MBP e PLP do nervo óptico, mas reduziu os seus niveis no dNGL, CS e CC após tratamento, indicando desmielinização dessas estruturas. Neuroinflamação foi induzida no dNGL após dieta com cuprizona observada por meio de expressão de Iba-1 e aumento do RNAm para iNOS, TNF-α, COX-2 e GFAP. Alterações pré-sinápticas no dNGL foram detectadas pelo aumento de vGLUT-2 após o tratamento com cuprizona, e pós sinápticas, pelo aumento do RNAm para NR2B e do seu conteúdo após 5 semanas de tratamento, sem modulação de NR2A. De fato, aplicação do antagonista do NR2B em fatias ex-vivo contendo o dNGL mostrou que seu componente no potencial de campo era maior após tratamento com cuprizona, aumentando a razão NR2B/NR2A. Além disso, o neurotraçador CTB injetado intraocularmente mostrou redução da segregação binocular no dNGL após 5 semanas de ingestão de cuprizona, indicando que as mudanças sinápticas induzidas pela desmielinização inflamatória nos animais tratados com cuprizona, induziu expansão de fibras retinogeniculadas no adulto. Em conjunto, os dados sugerem que presença de componentes inflamatórios em estruturas visuais subcorticais interfere no ordenamento de conexões retinofugais independente do seu estágio de maturidade, via alterações glutamatérgicas ou colinérgicas.

Interleucina-2, Inflamação, Plasticidade Sináptica
Visual system development requires the formation of precise connections mediated by glutamatergic and cholinergic activity. Changes in electrical activity implicates in synaptic reorganization, resulting in structural plasticity. These events can be reciprocally regulated by immune proteins and myelination, such that changes of theirs contents induces refinement disruption. Neuroinflammation models, as zymosan or IL-2 intraocular injection, or even cuprizone diet-induced inflammatory demyelination can be used to study the inflammation or demyelination effects on different CNS events. Therefore, we investigated the effect of these models on retinofugal plasticity, and the neurochemical mechanisms involved. Lister Hooded rats received IL-2 (156U/uL) or zimosan (60,5ug/uL) intravitreous injection on PND 10 or 21 and were euthanized on PND14 or 28. C57/BL6 mice on PND42 were feeded with 0,2% cuprizone mixed to chow for 3 or 5 weeks. IL-2 injection induced Iba-1 expression enhancement, nAChR β2 subunit content reduction, in parallel to Egr-1 and PSD-95 reduction, indicating that cholinergic activity suppression induced activity impairment and synaptic contact retraction. Moreover, IL-2 injection reduced AMPA and NMDAR subunits content, GLUR2 and NR2B, concomitantly to acetylcholinesterases activity reduction. However, Egr-1 content and PSD-95 were unaffected, suggesting that glutamatergic activity impairment were counterbalanced by cholinergic increase. In parallel, HRP injection showed that IL-2 induces ectopic retinotectal sprouting, in response to the retinal changes. Similarly, zymosan-induced intravitreous inflammation, with TNF-α reduction, promoted retinotectal reorganization in the beginning and at the end of critical period. The cuprizone diet model didn’t affect the optic nerve MBP and PLP RNAm levels, but diminished theirs levels in dLGN, SC and CC after treatment, indicating demyelination of these structures. Neuroinflammation in dLGN after cuprizone diet was observed by Iba-1 positive cells and iNOS, TNF-α, COX-2 and GFAP RNAm levels enhancement. Presynaptic changes in dLGN were detected by vGLUt2 overexpression after cuprizone diet, and postsynaptic alterations, by increased NR2B RNAm and content after 5 weeks of treatment, without NR2A modulation. Indeed, ex-vivo dLGN slice NR2B antagonist application showed that its field potential component became larger after cuprizone treatment, increasing the NR2B/NR2A ratio. Moreover, the neurotracer CTB intraocular injection showed reduced dLGN binocular segregation after 5 weeks of cuprizone diet, indicating that inflammatory demyelination-induced synaptic changes in cuprizone-treated animals promoted retinogeniculate sprouting in adults. Summarizing, these data suggest that inflammatory components modulates the retinofugal connections, independently of their maturational stage, mediated by glutamatergic and cholinergic changes.
Interceukin-2, Inflammation, Synapyie Plasticity
1
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PORTUGUES
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
O trabalho possui divulgação autorizada
Tese de Doutorado-Sheila Espírito Santo.pdf

Contexto

BIOFISICA
BIOLOGIA MOLECULAR E ESTRUTURAL
-

Banca Examinadora

ALFRED SHOLL FRANCO
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
CECILIA HEDIN PEREIRA Docente - PERMANENTE
FLAVIA CARVALHO ALCANTARA GOMES Participante Externo
PATRICIA FRANCA GARDINO Docente - COLABORADOR
ROSALIA MENDEZ-OTERO Docente - PERMANENTE

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - Apoio à Pós-Graduação 7
CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLOGICO - Bolsa de Mestrado GM e Doutorado GD 41

Vínculo

Bolsa de Fixação
Instituição de Ensino e Pesquisa
Ensino e Pesquisa
Sim
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