A triagem funcional de bibliotecas metagenômicas é uma importante ferramenta para descoberta de novas moléculas e enzimas com grande potencial biotecnológico. Foi identificado um potencial clone produtor de protease de biblioteca metagenômica derivada de sedimento de Manguezal da Baía de Camamu-Ba. Sabe-se que, proteases exógenas estão sendo alvos de estudos na terapia contra o câncer. Logo, a protease foi submetida à interação com linhagem de macrófagos murinos (J774) e a linhagem de carcinoma colorretal humano (HT-29) para avaliação da atividade antitumoral. A protease PR4A3 possui peso molecular de 60 kDa. A análise do ms/ms em ESI-Q-TOF resultou em nove peptídeos similares a peptidase M28 de Bacillussafensis. A sequência alinhada mostrou 47,48 % de identidade e 82,74 % de similaridade com domínios conservados da glutamylaminopeptidase de metagenoma de intestino humano e 32,12 % de cobertura. A PR4A3 pertence à família das peptidases (M42) zinco dependente. Possui pH ótimo de 8,5 e atividade ótima à 65 ° C. Possui moderada termotolerância e termoestabilidade, nas temperaturas de 40 e 50°C. Após exposição das células J774 e HT-29 à PR4A3, verificou-se que foi induzido um estágio final de apoptose em HT- 29, não sendo capaz de causar danos em J774. Além disso, induziu a produção de óxido nítrico em macrófagos mostrando também características antioxidantes. Os resultados deste trabalho sugerem que a metaloprotease PR4A3 possui características desejáveis em aplicações biotecnológicas e abrem perspectivas para novas pesquisas da PR4A3 em tratamento de carcinoma de colorretal, além de outros tipos de câncer.