Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS) leishmanioses são doenças consideradas de grande importância para a saúde mundial. Todavia, as alternativas terapêuticas disponíveis favorecem a seleção de cepas resistentes do parasito e apresentam baixos índices de segurança e eficácia. Em conjunto,essas informações mostram que há uma emergente necessidade de se investigar novas alternativas terapêuticas. Neste sentido, vias bioquímicas essenciais para o parasito são consideradas como promissoras para o desenvolvimento de fármacos. A enzima tripanotiona redutase (TR) é uma flavoproteína NADPH dependente que protege o parasito contra o estresse oxidativo. O fato de ser exclusiva dos tripanossomatídeos torna a TR um alvo atrativo para o desenvolvimento de fármacos. No presente trabalho, realizou-se a clonagem do gene que codifica tripanotiona redutase de Leishmania braziliensis (LbTR)em fusão com a N-utilization substance A (NusA) em um sistema heterólogo de expressão E. coli/Rosetta (DE3). A proteína recombinante foi purificada por cromatografia de afinidade (resina Ni/sefarose), utilizando gradiente crescente de imidazol, seguida declivagem com TEV protease e purificação por exclusão molecular. O rendimento médio dessas etapas é de 4mg.L-1. Ensaios de deslocamento térmico(ThermoFAD)sugerem que LbTR é mais estável no tampão HEPES 7,5do que em Tris-HCl 7,5 (Tm = 75,3 ±0,05 vs73,5 ±0,03, respectivamente).Ensaios espectrofotométricosmostram que LbTR tem afinidade pelo cofator(Km NADPH 0,92 ± 0.09µM)cerca de dez vezes maior que LiTR (Km NADPH 12 ± 2.5µM). Por outro lado, a afinidade pelo substrato LbTR (Km T(S)2= 13,77± 0.41µM ) é cerca de cinco vezes menor que a encontrada para TbTR (Km T(S)2= 2,35 ± 0.07µM). Apesar disso, a eficiência catalítica (Kcat/Km) de LbTRem relação ao substratoé cerca e cinco vezes maior que de LiTR (5,64 x 106 M−1 s−1vs1,1 × 106M−1 s−1,respectivamente).As características únicas de LbTR, descritas pela primeira vez nesse trabalho, serão úteis para o planejamento de inibidores enzimáticos candidatos a fármacos leishmanicidas.