A leishmaniose é considerada pela OMS uma das seis doenças parasitárias de interesse prioritário devido à elevada incidência, largo espectro clínico e diversidade epidemiológica. No Brasil, destaca-se a leishmaniose cutânea causada pela espécie L. braziliensis, cujo tratamento é limitado a fármacos que apresentam pouca eficácia e efeitos adversos severos. Entre as vias bioquímicas que podem ser exploradas para superar esse dilema, a via de biossíntese de esteróis é promissora, pois o ergosterol e seus derivados C24-alquil são essenciais para a viabilidade do parasita. A heme-proteína Lanosterol 14-alfa desmetilase (C14DM) é uma das enzimas mais importantes da via biossintética de esteróis sendo amplamente estudada, contudo, não existem informações estruturais ou cinéticas sobre C14DM de L. braziliensis. De forma análoga, a escassez de informações estruturais sobre a enzima Esterol C24-metiltransferase (C24-SMT), que participa de uma etapa exclusiva para síntese de ergosterol e derivados C24-alquil. Diante desse cenário, o objetivo deste trabalho foi investigar estratégias para expressão recombinante e purificação das enzimas C14DM (capítulo I) e C24-SMT (capítulo II) de L. braziliensis. Os resultados obtidos sugerem que embora a substituição dos primeiros 21 resíduos, presentes no domínio N-terminal da LbC14DM pelos resíduos MAKKKKK, seja essencial para expressão da proteína na forma solúvel, o rendimento global da purificação é baixo (≈ 1 mg/L) e apenas 13,32% da proteína encontra-se complexada ao grupo heme. Por outro lado, o sistema de expressão pET32a/E. coli C41 (DE3) permite obter cerca de 35 mg/L LbC24-SMT, com pureza superior a 90%, após as etapas de purificação cromatográfica. De uma forma geral, os resultados apresentados lançam as bases para estudos de caracterização estrutural e padronização de ensaios in vitro que permitam a identificação de inibidores dessas importantes enzimas.