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Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
BIOTECNOLOGIA (28002016006P3)
Educação Presencial
Caracterização molecular e estrutural de endoglucanases de Moniliophthora perniciosa (Stahel) Aime & Phillips-Mora
JAMILLE DE SANTANA MELO ADORNO
DISSERTAÇÃO
29/09/2017

Celulases são enzimas degradadoras de celulose produzidas por diversos microrganismos sendo os fungos filamentosos um dos principais produtores. Estão diretamente envolvidas na degradação da parede celular vegetal, o que permite sua vasta aplicação em diversos segmentos industriais como a indústria alimentícia e de biocombustíveis. Resíduos lignocelulósicos, como o bagaço-de-cana, são abundantemente produzidos no Brasil e estão disponíveis para utilização biotecnológica. Celulases na forma recombinante têm se mostrado mais estáveis do que as enzimas selvagens, favorecendo seu potencial uso em aplicações agroindustriais. Baseado nisso, esse trabalho teve por objetivo a caracterização molecular e estrutural de endoglucanases de Moniliophthora perniciosa. As etapas foram: ativação e cultivo do M. perniciosa em diferentes meios de cultura indutores de celulases; extração do RNA e amplificação do produto referente à expressão de duas endoglucanases por diferentes métodos; modelagem molecular por homologia e construção da estrutura 3D apresentando o motivo catalítico de ambas as sequências obtidas. O meio WY foi o melhor para indução de celulases, o meio BDA para cultivo e ativação e o meio batata para a reativação do fungo. Kits comerciais mostraram-se mais favoráveis que o método do trizol para obtenção de RNA com qualidade e pureza que propiciaram a síntese de cDNA, comprovada pela amplificação dos fragmentos específicos relativos às endoglucanases. A descrição da estrutura tridimensional das duas endoglucanases demonstrou que ambas as sequências proteicas têm enovelamento e motivo catalítico típicos de endoglucanases de fungos, mostrando-se favoráveis para produção recombinante como ferramenta para futura aplicação no aproveitamento de resíduos lignocelulósicos.

Celulase;Fungo filamentoso. Enzima termoestável. RNA. cDNA. Resíduos lignocelulósicos. Modelagem Molecular.
Cellulases are cellulose degrading enzymes produced by various microorganisms with filamentous fungi being one of the main producers. They are directly involved in the degradation of the vegetal cell wall which allows its wide application in several industrial segments as the food and biofuels industries. Lignocellulosic residues such as sugar cane bagasse are abundantly produced in Brazil and are available for biotechnological use. Recombinant cellulases have been shown to be more stable than wild-type enzymes, favoring their potential use in agro-industrial applications. Based on this, this work aimed to characterize molecular and structurally endoglucanases of Moniliophthora perniciosa. The steps were: activation and cultivation of M. perniciosa in different cellulase inducing culture media; RNA extraction and amplification of the product related to the expression of endoglucanases by different methods; 3D structure construction by molecular modeling showing the catalytic motif of both sequences obtained. WY medium was the best for cellulase induction, BDA medium for cultivation and activation and the Potato medium for fungus reactivation. Commercial kits proved to be more favorable than the trizol method to obtain RNA with quality and purity that allowed cDNA synthesis, proved by specific fragments amplification related to endoglucanases. The description of 3D structure of the two endoglucanases has shown that both protein sequences have folding and catalytic motif typical of fungal endoglucanases, showing them favorable for the recombinant production as a tool for future application in the lignocellulosic residues treatment.
Cellulase;Filamentous fungi. Thermostable enzyme. RNA. cDNA. Lignocellulosic waste. Molecular Modeling.
01
70
PORTUGUES
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
O trabalho não possui divulgação autorizada

Contexto

BIOTECNOLOGIA COM ÊNFASE EM RECURSOS NATURAIS DA REGIÃO NE
ANÁLISE ESTRUTURAL E FUNCIONAL DE MACROMOLÉCULAS DE MICRORGANISMOS, ANIMAIS E PLANTAS COM POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO
-

Banca Examinadora

RAQUEL GUIMARAES BENEVIDES
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
MANOELITO COELHO DOS SANTOS JUNIOR Docente - PERMANENTE
RAFAEL DA CONCEICAO SIMOES Participante Externo

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - Programa de Demanda Social 24

Vínculo

Servidor Público
Empresa Pública ou Estatal
Outros
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