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Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
BIOTECNOLOGIA (28002016006P3)
Educação Presencial
DIVERSIDADE DE BACTÉRIAS ASSOCIADAS AO SISAL E APLICAÇÃO NO CONTROLE BIOLÓGICO DE Aspergillus welwitschiae E Colletotrichum musae
CAROLINE LOPES DAMASCENO
TESE
30/11/2018

A fibra de sisal extraída da Agave sisalana é uma das fibras naturais mais rígidas e, portanto, requerida em diversos segmentos industriais em todo mundo, sobretudo nas últimas décadas, com o aumento das mobilizações e aplicações de leis ambientais voltadas à substituição das fibras sintéticas. Neste contexto, o cultivo de sisal em sistemas de produção de base familiar, sem manejo e em condições edafoclimáticas extremas no semiárido da Bahia – Brasil, que é o maior produtor mundial dessa fibra, tem sido explorado. Para atender as demandas de exportação da fibra de sisal, o principal desafio é controlar a podridão vermelha do caule causada por Aspergillus welwitschiae que tem ocasionado perdas de até 80 % da produção. Assim, considerando o atual sistema de cultivo de Agave, o controle biológico é a alternativa mais viável para controle dessa doença e, nesta perspectiva, o estudo do microbioma da cultura é crucial para prospectar e explorar o potencial antagônico de micro-organismos. à luz destas informações, o objetivo deste trabalho foi: i) estudar a diversidade de bactérias associadas ao sisal (Agave sisalana e do Híbrido 11648 ) por métodos dependentes e independentes de cultivo e abordagem metagenômica por NGS; ii) isolar, identificar e selecionar bactérias com potencial antagonista ao A. welwitschiae; iii) realizar estudos in vitro e in vivo com potenciais bactérias antagonistas contra a podridão vermelha do caule de sisal e avaliar também contra antracnose da banana causada por Colletotrichum musae, ampliando, assim o potencial antagonista das agentes de biocontrole (ACBs) selecionadas para controle de fitopatógenos que acometem culturas economicamente importantes que são produzidas na Bahia. Os estudos com abordagem metagenômica foram realizados a partir de bibliotecas obtidas da amplificação da região V4-V5 do gene 16S rRNA sequenciadas na plataforma Ion Torrent®; e as Unidades Taxonômicas Operacionais (OTUs) foram capazes de agrupar as sequências e classificar os principais filos presentes no microbioma de folha, caule, raiz e solo associado à rizosfera de A. sisalana e do Híbrido 11648 (Actinobacteria, Proteobacteria, Cyanobacteria/Chloroplast). O método direto (cultivo) foi utilizado para isolar e identificar representantes de Bacillus, Enterobacter e Pantoea para seleção de candidatos a antagonistas contra A. welwitschiae e Colletotrichum musae. Os testes in vitro (screening por “massive stamping drop plate”, pareamento de culturas, inibição por compostos voláteis, atividade enzimática e prospecção de genes de vias biossintética de antimicrobianos associados ao controle biológico) e in vivo (inoculação no hospedeiro: mudas de sisal e frutos de banana) permitiram selecionar as ACBs: Enterobacter hormaechei_BST80, E. asburiae_BST22, Bacillus velezensis_BLE07, Lysinibacillus fusiformis_BS29 que reduziram em 90 % a severidade da podridão vermelha do caule de sisal (cap. 3) e Bacillus velezensis_BLE07, Enterobacter cloacae_ BST50, Serratia marcescens_BS4 e Stenotrophomonas maltophilia_ BST63 que reduziram em até 97 % o progresso da antracnose em bananas (cap. 4). Estas bactérias foram positivas para genes da via biossintética de lipopeptídeos das famílias Surfactina, Iturina e Fengicina e particularmente, B. velezensis apresentou resultado similar ao fungicida comercial Tiabendazol (Tecto SC®), registrado e utilizado no controle de doenças pós-colheita, como a antracnose em banana. Este estudo é o primeiro relato da diversidade de bactérias de sisal produzida no semiárido da Bahia - Brasil, bem como da seleção e aplicação de bactérias no controle biológico de A. welwitschiae e Colletotrichum musae. Conseguimos demostrar a eficácia, a viabilidade e o potencial biotecnológico de ACBs que poderão ser empregadas por diferentes métodos (formulações e concentrações em UFC) como agentes de controle biológico pré e pós-colheita nas culturas de sisal e banana, respectivamente.

Bactérias antagonistas;Asparagaceae;metagenômica;controle biológico;diversidade microbiana
Banana is one of the most consumed fruits worldwide and a tropical climacteric commodity that requires methods of harvesting, storage and transportation, which burden its marketing. It is one of the food crops most susceptible to diseases, such as anthracnose caused by Colletotrichum musae, considered the main postharvest disease of bananas. This pathogen is a quiescent fungus that infects the fruits during preharvest which symptoms appear at postharvest with advanced stage of maturity. Although efficient, the control using fungicides requires more than one pulverization (application), which is performed directly on the fruit. Therefore, this is unfeasible if one considers the time elapsed between harvesting and transportation of fruits, when symptoms are already visible. Furthermore, this control method has commercial and environmental restrictions which prevent this product of being certified as organic, which adds value to commodities, increasing the export volume of this fruit. As an alternative to chemical control, biological control agents (BCAs) have been studied and used. In this context, paradigms are established inherently to each pathosystem, especially the microbiota. In light of this information, we have selected 12 bacteria from in-vitro tests, which are trivial for selecting biocontrol agents. In in vivo testing, the following taxa were efficient in controlling the anthracnose: Bacillus velezensis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens and Stenotrophomonas maltophilia. B. velezensis showed similar performance as the commercial fungicide Thiabendazole (Tecto SC®). Moreover, B. velezensis inhibited mycelial growth and pathogen sporulation and was positive for cellulase and xylanase activity, which are mechanisms of action relevant to a biocontrol agent. Furthermore, this bacterium can be considered as a BCA of direct application by spraying (as in this study) and fruit immersion, or can be used systemically (formulated) since B. velezensis is not pathogenic to humans.
Musa paradisiaca;biological control;anthracnose;Bacillus velezensis;BCAs
01
161
PORTUGUES
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
O trabalho possui divulgação autorizada
Tese_Caroline Damasceno_PPGbiotec_UEFS_versão final.pdf

Contexto

BIOTECNOLOGIA COM ÊNFASE EM RECURSOS NATURAIS DA REGIÃO NE
CARACTERIZAÇÃO, CONSERVAÇÃO E MANEJO SUSTENTÁVEL DE RECURSOS BIOLÓGICOS COM POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO
Caracterização, conservação e manejo sustentável de recursos biológicos com potencial biotecnológico

Banca Examinadora

LENALDO MUNIZ DE OLIVEIRA
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
ELIZABETH AMELIA ALVES DUARTE Participante Externo
RAQUEL GUIMARAES BENEVIDES Docente - PERMANENTE
ADRIANA QUEIROZ DE ALMEIDA Participante Externo
HARLLEN SANDRO ALVES SILVA Participante Externo
ADAILSON FEITOZA DE JESUS SANTOS Participante Externo

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - Programa de Demanda Social 48

Vínculo

-
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-
Não
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