A atividade leiteira na região sul do estado do Espírito Santo é desenvolvida, em sua grande maioria, por agricultores de base familiar. Tal atividade contribui para a sustentabilidade econômica e social da maioria da população rural ativa, por meio de geração de renda e empregos. Por meio de visitas in loco em propriedades rurais, verificou-se algumas inadequações no manejo empregado na produção e armazenamento do leite cru refrigerado, o que pode comprometer sua qualidade e inocuidade. Objetivou-se avaliar a qualidade microbiológica, físico-química e verificar a presença de resíduos de antibióticos em amostras de leite cru, coletado em nove tanques de refrigeração individuais e coletivos localizados em propriedades rurais pertencentes ao município de Alegre, ES. A coleta das amostras de leite foi realizada no período de março a julho de 2018. Realizou-se a contagem de bactérias aeróbias mesófilas ou contagem bacteriana total (CBT) e Staphylococcus aureus (STAPHY). As análises físicoquímicas foram realizadas de acordo com a Instrução Normativa 68/2006; além da detecção de resíduos de antibióticos. Para os valores de contagem de bactérias total (CBT) verificou que 44,44% das amostras encontravam-se em conformidade com a legislação vigente. Os valores de S. aureus (Sthapy) ficaram entre <102 a 3,6x106, UFC mL-1. Estes resultados são preocupantes devido a possibilidade de formação de toxinas termorresistentes, além deste microrganismo ser causador de mastite. Em relação às análises físico-químicas, constatou-se que 33,33% das amostras encontravam-se em conformidades com a legislação. Em todas as amostras de leite cru refrigerado não foram constatados resíduos de antibióticos. Concluiu-se que 22,22% das amostras analisadas encontravam-se em conformidade em relação a todos os parâmetros analisados e exigidos pela Instrução Normativa 76/2018 do MAPA. São necessárias mudanças nas práticas adotadas para obtenção de leite com qualidade e inocuidade. A adoção dessas medidas contribuiria para a saúde dos consumidores e para a sustentabilidade do setor na região e no estado do Espírito Santo.