A Leishmaniose Visceral Humana (LVH) é uma doença negligenciada que ocorre em 88 países dos cinco continentes, sendo endêmica em regiões tropicais e subtropicais. Por ser considerada uma doença crônica grave, o diagnóstico precoce e tratamento adequado são essenciais. A LV é causada por protozoários do gênero Leishmania ssp e a transmissão pelo vetor é a forma mais comum, contudo outras possibilidades de transmissão podem ocorrer, dentre elas, a transfusão sanguínea. No presente estudo, avaliou-se a presença de Leishmania em indivíduos assintomáticos doadores de sangue da microrregião de Adamantina SP. Analisou-se trezentos e vinte quatro (324) amostras de doadores de sangue, pelas técnicas de Cultura em sangue periférico, RIFI e PCR, sendo esta última realizada apenas para amostras positivas na cultura e no teste sorológico. Nos dados demográficos, obteve-se uma prevalência para doadores do sexo masculino de 73,46%, predominando na faixa etária entre 30-39 anos com 36,72%. Na análise da cultura de sangue periférico todas as amostras foram negativas, a RIFI apresentou 7(2,16%) amostras reagentes e a análise por PCR das amostras positivas para RIFI, identificou positividade em 3 (42,85%) amostras. Este estudo possibilitou a identificação da presença de indivíduos assintomáticos em área endêmica pela identificação de material genético de Leishmania spp. em doadores, sustentando a hipótese de transmissão por transfusão sanguínea.