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Dados do Trabalhos de Conclusão

UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALFENAS
CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS (32011016003P1)
"Efeitos do antioxidante Tempol nas alterações renais induzidas pela metaloproteinase-2"
JESSYCA MILENE RIBEIRO
DISSERTAÇÃO
25/02/2021

As metaloproteinases de matriz do tipo 2 (MMP-2) são endopeptidases dependentes de cálcio, capazes de, dentre outras funções, degradarem os componentes da matriz extracelular. A expressão dessas enzimas nos rins é complexa, mas sabe-se que está presente nos glomérulos e túbulos renais. Vários fatores podem ativar essa metaloproteinase como, por exemplo, o estresse oxidativo, que faz isso expondo o seu sítio catalítico. Sabe-se que o aumento da atividade da MMP-2 está presente no desenvolvimento e progressão de doenças renais, e a sua inibição tem sido valorizada como uma importante estratégia para o tratamento destas doenças. A hipótese deste estudo é que a administração in vivo da MMP-2 leve ao aumento do estresse oxidativo, causando alterações renais. E que o uso do antioxidante Tempol pode diminuir essas alterações. Para avaliação desta hipótese, camundongos receberam MMP-2 recombinante (150ng/g, via i.p.) diariamente durante 4 semanas, sendo tratados ou não com o antioxidante Tempol (18 mg/kg/dia) por gavagem. Animais controles receberam salina por via intraperitoneal. Ao fim do protocolo, foram colhidos o sangue total para obtenção do plasma e os rins. O plasma foi utilizado para a determinação de ureia e creatinina. Um dos rins foi fixados para histologia e o outro congelado para avaliação da peroxidação lipídica através da quantificação das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), das espécies reativas de oxigênio (ERO) por dihidroetideo (DHE), atividade da superóxido dismutase (SOD), da catalase (CAT), níveis de glutationa (GSH), atividade da mieloperoxidase (MPO), atividade gelanolítica por meio de Zimografia em gel e in situ, e imunohistoquímica para verificar os níveis teciduais de MMP-2, do inibidor tecidual de MMPs (TIMP-2) e de 3-nitrotirosina. Para a análise estatística utilizamos ANOVA two way, seguido por teste Sidak’s post-hoc (p<0.05). Não foram encontradas diferenças significativas nos níveis de ureia plasmáticos (p>0,05), diferente da creatinina, que apresentou aumento significativo no grupo MMP-2 tratado com Tempol (p<0,05). Não foram encontradas diferenças significativas nos níveis de TBARS (p>0,05). A atividade tecidual da SOD não sofreu alteração significativa (p>0,05), já a CAT teve sua atividade diminuída no grupo MMP-2 tratado com água (p<0,05). Os níveis de GSH foram aumentados nos grupos MMP-2 tratados ou não com Tempol (p<0,05). A atividade da Mieloperoxidase aumentou significativamente (p<0,05) no grupo MMP-2 tratado com Tempol. O aumento da fluorescência vermelha evidenciou um aumento tecidual de ERO nos grupos MMP-2 tratados ou não com Tempol (p<0,05). Não foram encontradas diferenças significativas na zimografia in situ (p>0,05). A análise da zimografia em gel evidenciou uma maior atividade gelatinolítica no grupo que recebeu injeções diárias da metaloproteinase tratado com Tempol (p<0,05). As análises imunohistoquímicas demonstraram um aumento significativo (p<0,05) dos níveis de MMP-2 e 3-nitrotirosina no tecido renal dos animais que receberam a protease tratados ou não com o antioxidante. Não foram encontradas alterações nos níveis de TIMP-2 (p>0,05). Nossos resultados sugerem que a administração de MMP-2 causou alterações renais leves, e que o tratamento com Tempol não foi capaz de reverter estes danos, causando ainda mais prejuízo quando administrado concomitante à MMP-2.

Metaloproteinase – 2;Rim;Estresse oxidativo;Tempol.
Matrix metalloproteinases type 2 (MMP-2) are calcium-dependent endopeptidases, capable of, among other functions, degrading the components of the extracellular matrix. The expression of these enzymes in the kidneys is complex, but it is known to be present in the renal glomeruli and tubules. Several factors can activate this metalloproteinase, such as oxidative stress, which does this by exposing its catalytic site. It is known that the increase in MMP-2 activity is present in the development and progression of kidney diseases, and its inhibition has been valued as an important strategy for the treatment of these diseases. The hypothesis of this study is that the in vivo administration of MMP-2 leads to an increase in oxidative stress, causing renal changes. And that the use of the antioxidant Tempol can reduce these changes. To evaluate this hypothesis, mice received recombinant MMP-2 (150ng / g, via i.p.) daily for 4 weeks, being treated or not with the antioxidant Tempol (18 mg / kg / day) by gavage. Control animals received saline intraperitoneally. At the end of the protocol, whole blood was collected to obtain plasma and kidneys. Plasma was used to determine urea and creatinine. One kidney was fixed for histology and the other was frozen for evaluation of lipid peroxidation through the quantification of reactive species to thiobarbituric acid (TBARS), reactive oxygen species (ROS) by dihydroetide (DHE), superoxide dismutase (SOD) activity , catalase (CAT), glutathione levels (GSH), myeloperoxidase activity (MPO), gelatinolytic activity by means of Zimography in gel and in situ, and immunohistochemistry to check tissue levels of MMP-2, the tissue MMP inhibitor (TIMP-2) and 3-nitrotyrosine. For the statistical analysis we used ANOVA two way, followed by the Sidak’s post-hoc test (p <0.05). No significant differences were found in plasma urea levels (p> 0.05), different from creatinine, which showed a significant increase in the MMP-2 group treated with Tempol (p <0.05). No significant differences were found in TBARS levels (p> 0.05). The tissue activity of SOD did not change significantly (p> 0.05), whereas CAT had its activity decreased in the MMP-2 group treated with water (p <0.05). GSH levels were increased in the MMP-2 groups treated or not with Tempol (p <0.05). Myeloperoxidase activity increased significantly (p <0.05) in the MMP-2 group treated with Tempol. The increase in red fluorescence showed an increase in tissue ROS in the MMP-2 groups treated or not with Tempol (p <0.05). No significant differences were found in in situ zymography (p> 0.05). The analysis of the gel zymography showed a greater gelatinolytic activity in the group that received daily injections of the metalloproteinase treated with Tempol (p <0.05). Immunohistochemical analyzes showed a significant increase (p <0.05) in the levels of MMP-2 and 3-nitrotyrosine in the renal tissue of the animals that received the protease treated or not with the antioxidant. No changes were found in TIMP-2 levels (p> 0.05). Our results suggest that the administration of MMP-2 caused mild renal changes, and that treatment with Tempol was not able to reverse these damages, causing even more damage when administered concomitantly with MMP-2.
Metalloproteinase-2;Kidney;Oxidative stress;Tempol.
01
80
PORTUGUES
UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALFENAS
O trabalho não possui divulgação autorizada

Contexto

CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
BIOQUÍMICA E FARMACOLOGIA APLICADAS ÀS CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
EFEITOS DE INTERVENÇÕES FARMACOLÓGICAS NO DANO A ÓRGÃOS-ALVO E AVALIAÇÃO DA FARMACOTERAPIA EM DOENÇAS AGUDAS E CRÔNICAS – ESTUDOS PRÉ-CLÍNICOS, CLÍNICOS, REVISÕES SISTEMÁTICAS E META-ANÁLISE

Banca Examinadora

CARLA SPERONI CERON
DOCENTE - PERMANENTE
Sim
Nome Categoria
MARIA RITA RODRIGUES Docente - PERMANENTE
ELEN RIZZI SANCHEZ Participante Externo
CARLA SPERONI CERON Docente - PERMANENTE

Financiadores

Financiador - Programa Fomento Número de Meses
FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP - Programa de Demanda Social 24

Vínculo

-
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Não
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