As toxinas alfa (CPA), beta (CPB) e épsilon (ETX) de Clostridium perfringens são responsáveis por causar enfermidades de difícil erradicação e com potencial letalidade em animais de produção, sendo a vacinação dos rebanhos ainda a melhor estratégia de controle. Atualmente as vacinas recombinantes clostridiais apresentam resultados significativos na indução de títulos de anticorpos neutralizantes e demostram ser uma alternativa viável frente a produção convencional de toxóides clostridiais comerciais. Entretanto são necessários estudos em relação a longevidade da resposta imune humoral induzida pelas proteínas recombinantes nos animais imunizados, preferencialmente nas espécies alvo. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi mensurar a resposta imune humoral de bovinos imunizados com vacinas trivalentes contendo as proteínas recombinantes alfa (rCPA), beta (rCPB) e épsilon (rETX) de C. perfringens, produzidas em Escherichia coli, em três diferentes concentrações (100, 200 e 400 µg) de cada uma das proteínas, durante um período de 12 meses. As vacinas recombinantes contendo 200 µg (VR2) e 400 µg (VR3) foram estatisticamente semelhantes aos 56 dias e obtiveram melhor desempenho ao longo do estudo, pois induziram títulos médios de anticorpos neutralizantes mais elevados e detectáveis por até 150 e 180 dias, respectivamente. Em relação a produção de escala industrial, VR2 seria a formulação mais econômica e viável, pois atingiu resultados similares a VR3 usando metade da concentração de proteínas recombinantes em sua formulação. No entanto, nenhuma das vacinas testadas induziu a produção de títulos de anticorpos detectáveis até os 365 dias de experimento, período este de revacinação normalmente indicado nos protocolos de vacinação, reiterando a necessidade e a importância das pesquisas na área de vacinologia a fim de estabelecer maior longevidade da resposta imune humoral contra essas toxinas clostridiais nos animais, além da necessidade de discussão sobre os calendários e protocolos vacinais adotados na bovinocultura.