A brucelose é uma zoonose de distribuição global causada por bactérias do gênero Brucella. A transmissão ocorre entre animais e humanos através de contato direto e consumo de produtos lácteos não pasteurizados. Trata-se de uma doença de relevância em saúde pública e para a economia por apresentar problemas sanitários e impactos econômicos. Em humanos, os sinais clínicos são inespecíficos, podendo apresentar febre, fraqueza e perda de peso. Além disso, devido a características próprias da doença e diagnósticos imprecisos, pode ser confundida com outras enfermidades, tornando-a uma doença subnotificada e negligenciada. Já nos animais, acomete principalmente o sistema reprodutor, causando prejuízos para a cadeia produtiva. Como a bactéria possui múltiplas rotas de infecção e com os mamíferos sendo os principais hospedeiros naturais, gera um cenário de difícil controle e de real ameaça a saúde pública e qualidade de vida de pessoas e animais. Com isso, o objetivo desse trabalho foi realizar uma análise molecular de Brucella spp. em humanos e animais de companhia, durante o processo algumas amostras de amimais de produção também foram incluídos, todos provenientes de um fragmento florestal em um bioma na Amazônia. Para isso, foram utilizadas amostras do banco de DNA do Laboratório de Zoonoses e Saúde Pública, da Universidade Federal do Pará. Essas amostras haviam sido submetidas a extração de DNA e armazenadas a -20ºC. Um total de 566 amostras de DNA de sangue foi selecionado: caprino (1), ovinos (3), búfalos (8), bovinos (9), equinos (9), gatos (13), suínos (22), humanos (205), e cães (296). A PCR convencional foi conduzida utilizando os primers B4 e B5 que amplificam um fragmento de 223 pb do gene 16S rRNA. O DNA de Brucella spp. foi detectado em 1,95% (4/205) das amostras de humanos, já nas amostras dos animais domésticos e de animais de produção não foi detectado o DNA da bactéria. Esta é a primeira detecção de DNA Brucella spp. em humanos no bioma Amazônia. Conclui-se que, no fragmento florestal investigado, apenas as amostras de humanos atestaram a presença de DNA de Brucella spp.